Resumo

Neste artigo, avançamos a hipótese de que as células regenerativas autólogas derivadas do tecido adiposo (ADRCs) constituem uma nova opção para os doentes que vivem com retinite pigmentosa. Ao contrário de um fármaco com um único mecanismo de ação, as ADRCs regulam o vários factores contribuindo para a perda de visão de um doente.

Em 1857, o Dr. Donders identificou um grupo de doenças oculares incuráveis a que deu o nome de retinite pigmentosa (RP). Mas a situação não era assim tão simples: posteriormente, os investigadores descobriram mais de 100 genes que podem conter mutações que conduzem à retinite pigmentosa. No entanto, as anomalias genéticas não explicam tudo; metade dos casos de RP não apresenta antecedentes familiares nem explicação.

No entanto, apesar da complexidade da doença, alguns investigadores conseguiram mapear o processo degenerativo da RP. Retinite significa inflamação da retina. Essa inflamação conduz a uma espiral de degeneração da retina e do nervo ótico.

Na presença de infeção, lesão ou doença, as ADRCs deslocam-se para os locais de inflamação e iniciam um processo de reparação através de múltiplos mecanismos de ação.

É altura de uma nova opção

Os criadores de fármacos e de terapias genéticas continuam a seguir o modelo falhado de "uma molécula ou um gene para uma doença" para a RP. Esta abordagem minimalista não produziu um medicamento ou uma terapia genética que altere a progressão da doença ou melhore a melhor acuidade visual corrigida (BCVA) dos doentes.

No mundo real, as 100 000 pessoas nos EUA diagnosticadas com RP não dispõem de nenhuma opção que retarde, estabilize ou reverta a progressão da doença. Em vez disso, a maioria fica legalmente cega aos 40 anos. Por conseguinte, os doentes necessitam de um novo padrão de cuidados, independentemente da mutação genética ou de outra causa subjacente da RP.

Hipótese

Neste caso, colocamos a hipótese de que a Adipose-Dderivado Regenerativo COs ADRCs (ells) constituem uma nova opção para os doentes que vivem com retinite pigmentosa. Ao contrário de um medicamento com um único mecanismo de ação, os ADRCs regulam o vários factores que contribui para a perda de visão do doente.

A pedra angular da nossa hipótese é que todos os sistemas do corpo estão inter-relacionados e são dependentes. Como tal, a disfunção de vários sistemas contribui para as doenças degenerativas, incluindo a RP ^{[1] [2] [3] [4] [5]}

Especificamente, a desregulação multissistémica relacionada com a RP resulta em:

1. Estresse oxidativo
2. Níveis reduzidos de óxido nítrico
3. Inflamação sistémica elevada
4. Resposta imunitária anormal
5. Desregulação metabólica
6. Disfunção endotelial
7. Disfunção mitocondrial
8. Disfunção autonómica^{[6] [7] [8] [9]}

Estas anomalias conduzem à apoptose dos fotorreceptores da retina e à cegueira. ^[10]

IV Fundamentação do protocolo

Propomos a entrega IV de ADRCs com base em:

1. Um estudo em ratos que imita a RP humana demonstrou que a infusão IV é superior à administração sub-retiniana. “Aparentemente, as células estaminais exercem o seu efeito em toda a retina quando administradas por via sistémica. Em comparação, a administração subretiniana de células, incluindo células derivadas da medula óssea, resulta normalmente na recuperação de bastonetes e cones" (S. Wang, 2010) ^[11]
2. Um estudo em seres humanos com células estaminais mesenquimais do cordão umbilical (UCMSCs) confirmou a viabilidade, a segurança e os potenciais benefícios da administração sistémica de células estaminais. “A maioria dos doentes melhorou a sua melhor acuidade visual corrigida (BCVA) nos primeiros três meses. As proporções de doentes com BCVA melhorada ou mantida foram de 96,9%, 95,3%, 93,8%, 95,4%, 90,6% e 90,6% no 1º, 2º, 3º, 6º, 9º e 12º mês de seguimento, respetivamente. A maioria dos doentes (81,3%) manteve ou melhorou as suas acuidades visuais durante 12 meses.” (T. Zhao, 2020). Os investigadores sugeriram ainda que a ruptura da barreira hemato-retiniana (BRB) na progressão da RP poderá permitir que as células infundidas atinjam o tecido retiniano afetado sem que seja necessária uma injeção direta no olho. ^{[12] [13] [14]}
3. Um estudo que comparou a injeção intravenosa de UCMSCs com a injeção direta de um esteróide revelou que: “A infusão intravenosa de UCMSC apresenta uma ação lenta, mas persistente, no alívio do EM [edema macular] e pode melhorar a função visual durante um período mais prolongado.”^[15]
4. Um grupo japonês comparou os fatores tróficos secretados por ADRCs frescas com os secretados por ASCs (MSCs derivadas do tecido adiposo) cultivadas, provenientes do mesmo indivíduo. O estudo indica que as ADRCs são mais multifuncionais e potentes do que as células ASCs cultivadas. As ADRCs libertaram uma maior variedade de citocinas ou proteínas solúveis em quantidades significativamente superiores às das ASCs. ^[16]A comparação favorável acima referida estende-se às MSCs derivadas de outras fontes, tais como a medula óssea, o cordão umbilical e a placenta.
5. Por outro lado, vários estudos sobre a injeção direta relataram efeitos adversos, tais como rasgos na retina e fibrose. Por conseguinte, a infusão intravenosa apresenta vantagens tanto em termos de segurança como de administração.

Protocolo AMBROSE para doenças da retina:

1. Um cirurgião plástico certificado, recorrendo à lipoaspiração assistida por água (WAL), recolhe 400 cc de lipoaspirado. A WAL causa um trauma mínimo ao doente e ao tecido recolhido, resultando em rendimentos mais elevados de ADRC e numa maior viabilidade.
2. O Sistema Celution® separa as ADRCs do lipoaspirado.
3. Uma enfermeira insere um cateter intravenoso e administra manitol. O manitol é um álcool de açúcar que inibe temporariamente a barreira hemato-retiniana. Trata-se de um procedimento padrão para a administração de medicamentos na parte posterior do olho.
4. As ADRCs são administradas por via intravenosa numa perfusão de 20 minutos.

O procedimento ambulatório demora cerca de cinco horas. A preparação das células demora aproximadamente 2,5 dessas horas, durante as quais o doente repousa confortavelmente.

 

 

ADRCs

O termo «células regenerativas derivadas do tecido adiposo» (ADRCs) refere-se a uma preparação de grau clínico da fração vascular estromal (SVF). O papel inerente das ADRCs consiste em manter a homeostase celular, tecidular e sistémica.^{[17] [18] [19]}

As ADRCs constituem uma população heterogénea de células, que inclui células estaminais mesenquimais, outras células progenitoras, fibroblastos, células T reguladoras e macrófagos. Esta mistura inclui uma elevada percentagem de células endoteliais, células progenitoras endoteliais, macrófagos e leucócitos.

Depois de se dirigirem para um local de inflamação, as ADRCs libertam um secretoma que contém centenas de citocinas e fatores de crescimento no microambiente afetado pela doença. As células endógenas enviam sinais de volta às ADRCs.

Esta interação dá instruções para que os tipos de células necessários para a reparação se ativem — e para que aqueles que não são necessários (ou que são prejudiciais) se desativem. Dito de outra forma, a grande variedade de agentes biológicos presentes no secretoma restaura a estabilidade celular e a homeostase.

 

ADRCs – Miracle-Gro para a reparação dos nervos

O Miracle-Gro fornece às plantas do seu jardim os nutrientes de que necessitam para desenvolver raízes, caules, pétalas e folhas saudáveis. Tal como há situações em que fertilizamos uma planta com carência de nutrientes vitais, os ADRCs secretam fatores de crescimento essenciais para a saúde dos nossos cérebros, corações, músculos, nervos e assim por diante, à medida que envelhecemos. ^[20]

Um desses grupos é constituído pelos fatores neurotróficos (NTFs). Neuro refere-se aos nervos, enquanto trófico provém do grego antigo troféusque significa "de comida ou nutrição". Por outras palavras, os NTFs alimentam os nossos neurónios e nervos com nutrientes.

É de salientar que o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) estimula a formação de novos neurónios, as conexões entre as células nervosas e os nervos. Além disso, repara a bainha de mielina que envolve os nervos. Por outro lado, esta molécula notável tem propriedades anti-inflamatórias e antiapoptóticas. A diminuição dos níveis de BDNF está associada à progressão da RP. ^{[21] [22] [23] [24] [25]}

É de salientar a recente descoberta de células neuro-imunes nas ADRCs. As células neuroimunes inervam os tecidos e libertam BDNF.^[26] Além disso, outras células do tecido adiposo secretam uma grande quantidade de fatores neurotróficos.

Estudos em humanos mostram que as ADRCs libertam factores que:

• Reduzir a expressão de marcadores inflamatórios e autoimunes, incluindo, entre outros, o TNF-α e as células TH17.
• Reduzir a produção de endotelina-1, um conhecido constritor dos vasos sanguíneos e um dos culpados em subgrupos de doentes com RP.
• Entre eles contam-se o fator de crescimento placentário (PGF), o fator derivado de células estromais-1 (SDF-1) e o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), os quais contribuem para o crescimento e a estabilização de novos vasos sanguíneos. Estes fatores de crescimento têm também propriedades anti-inflamatórias e antiapoptóticas.
• Promove a transição de macrófagos M1 inflamatórios para macrófagos M2 anti-inflamatórios através da prostaglandina E2 (PGE2).

 

Penetração na barreira hemato-retiniana

Uma preocupação fundamental dos médicos e dos doentes no que diz respeito às doenças oculares é saber se as células estaminais adultas podem ser administradas de forma não invasiva e se conseguem atravessar com segurança a barreira hemato-retiniana (BRB), uma extensão da barreira hemato-encefálica. A BRB protege o nosso cérebro, os nossos olhos e o canal medular contra invasores microbianos. É a versão do nosso sistema nervoso central do Fort Knox. No entanto, em vez de uma estrutura de betão revestida a granito, as células epiteliais e endoteliais revestem as faces externa e interna da barreira hemato-retiniana, respetivamente. ^[27]

Três mecanismos permitem a migração das MSC e do secretoma da ADRC para o fundo do olho.

1. O manitol, um álcool de açúcar seguro, abre temporariamente a barreira hematoencefálica.
2. As ADRCs libertam citocinas que atravessam a barreira hematoencefálica.
3. As MSCs têm a capacidade de atravessar a barreira hematoencefálica. ^{[28] [29]}

Como os vasos linfáticos são paralelos ao sistema vascular, eles pode proporcionam uma via pela qual as células estaminais migram a partir do baço, contornando assim a barreira hematoencefálica. ^[30]

O Sistema Celution é um laboratório fechado e estéril, integrado numa única unidade. O Celution isola ADRCs autólogos de qualidade clínica a partir do lipoaspirado no próprio local de prestação de cuidados.

O Celution foi aprovado para utilização clínica em mais de 40 países, incluindo o Reino Unido, o Japão, a Coreia do Sul, a Nova Zelândia e países da União Europeia. Além disso, a FDA aprovou o Celution para nove ensaios clínicos.

Desde que o Celution foi aprovado na Europa e no Japão em 2007, não foram comunicados quaisquer eventos adversos relacionados com as células em ensaios, estudos ou na utilização clínica.^[32]

 

 

[1] Dantzer, R. Interações neuroimunitárias: do cérebro ao sistema imunitário e vice-versa. Physiol Rev. 2018;98(1):477-504.

[2] Tracey KJ. O reflexo inflamatório. Natureza. 2002;420(6917):853–859.

[3] Blaszkiewicz M et al. O papel das células neuroimunitárias na inervação do tecido adiposo. Mol Med. 2020;26:126.

[4] Zmora N et al. O papel do sistema imunitário na saúde e nas doenças metabólicas. Metabolismo Celular. 2017;25(3):506–521.

[5] Amiya E et al. A relação entre a função vascular e o sistema nervoso autónomo. Ann Vasc Dis. 2014;7(2):109–119.

[6] Okita A, Murakami Y, Shimokawa S, et al. Alterações nas moléculas inflamatórias séricas e a sua relação com a função visual na retinite pigmentosa. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2020;61(11):30.

[7] Vinik AI. O maestro da orquestra autonómica. Front Endocrinol (Lausana). 2012;3:71.

[8] Limoli PG et al. Propriedades antioxidantes e biológicas das células mesenquimais utilizadas no tratamento da retinite pigmentosa. Antioxidantes. 2020;9(10):983.

[9] Sorrentino FS, Bonifazzi C, Perri P. O papel do sistema da endotelina na desregulação vascular associada à retinite pigmentosa. J Ophthalmol 2015;2015:405234.

[10] Murakami Y et al. Proteína C-reativa e progressão da perda de visão na retinite pigmentosa. Acta Ophthalmol. 2018;96(2):e174–e179.

[11] Wang S, Lu B, Girman S, Duan J, McFarland T, et al. Terapia não invasiva com células estaminais num modelo em ratos para a degeneração retiniana e a patologia vascular. PLoS One. 2010;5(2):e9200.

[12] Zhao T et al. A infusão intravenosa de células estaminais mesenquimais do cordão umbilical mantém e melhora parcialmente a função visual em doentes com retinite pigmentosa avançada. Stem Cells Dev. 2020;29(16):1029–1037.

[13] Grant ZL et al. O bloqueio da apoptose endotelial revasculariza a retina num modelo de retinopatia isquémica. J Clin Invest. 2020;130(8):4235-4251.

[14] Lang M et al. Disfunção vascular na retinite pigmentosa. Acta Ophthalmol. 2019;97(7):660–664.

[15] Zhao T, Lie H, Wang F, Liu Y, Meng X, Yin Z, Li S. Estudo comparativo entre a injeção de acetonido de triancinolona na cápsula sub-Tenon modificada e a infusão intravenosa de células estaminais mesenquimais do cordão umbilical na retinite pigmentosa associada a edema macular. Front Pharmacol. 2021;12:694225.

[16] Hirose Y et al. Comparação entre os fatores tróficos secretados pela fração vascular estromal derivada do tecido adiposo humano e os secretados pelas células estromais/estaminais derivadas do tecido adiposo nos mesmos indivíduos. Cytotherapy. 2018;20(4):589–591.

[17] Kesten S, Fraser JK. Células regenerativas autólogas derivadas do tecido adiposo: uma plataforma para aplicações terapêuticas. Surg Technol Int. 2016;29:38–44.

[18] Vizoso FJ et al. Células estaminais mesenquimais na homeostase e nas doenças sistémicas: hipóteses, evidências e oportunidades terapêuticas. Int J Mol Sci. 2019;20(15):3738.

[19] Caplan AI. Células estaminais mesenquimais: está na hora de mudar o nome! Stem Cells Transl Med. 017;6(6):1445–1451.

[20] A Caplan et al. MSCs: As sentinelas e as salvaguardas das lesões. J Cell Physiol. 2016;231(7):1413–1416.

[21] Razavi S et al. Fatores neurotróficos e os seus efeitos no tratamento da esclerose múltipla. Adv Biomed Res. 2015;4:53.

[22] Huang JK et al. Regeneração da mielina na esclerose múltipla: com foco nas células estaminais endógenas. Neuroterapêutica. 2011;8(4):650–658.

[23] Lopatina T et al. As células estaminais derivadas do tecido adiposo estimulam a regeneração dos nervos periféricos: o BDNF secretado por estas células promove a cicatrização dos nervos e o crescimento de novo dos axónios. PLoS One. 2011;6(3):e17899.

[24] Suganuma S et al. As células regenerativas derivadas do tecido adiposo, não cultivadas, promovem a regeneração dos nervos periféricos. J Orthop Sci. 2013;18(1):145–151.

[25] Xu D et al. O fator neurotrófico derivado do cérebro reduz a inflamação e a apoptose do hipocampo em modelos experimentais Streptococcus pneumoniae meningite. J Neuroinflammation. 2017;14(1):156.

[26] Blaszkiewicz M et al. O papel das células neuroimunitárias na inervação do tecido adiposo. Mol Med. 2020;26:126.

[27] Campbell, M., Humphries, P. A barreira hemato-retiniana: junções apertadas e modulação da barreira. Adv Exp Med Biol. 2012;763:70–84.

[28] Liu L et al. Do sangue ao cérebro: será que as células estaminais mesenquimais transplantadas por via sistémica conseguem atravessar a barreira hematoencefálica? Stem Cells Int. 2013;2013:435093.

[29] Laroni A et al. Células estaminais mesenquimais para o tratamento de doenças neurológicas: imunorregulação para além da neuroproteção. Immunol Lett. 2015;168(2):183–190.

[30] Absinta M et al. As meninges de primatas humanos e não humanos apresentam vasos linfáticos que podem ser visualizados de forma não invasiva através da ressonância magnética. eLife. 2017;6:e29738.

[31] Perin EC, Willerson JT. «Buying New Soul». J Am Coll Cardiol. 2012;60(21):2250–2251.